凝膠電泳常見問題分析
更新時間：2015-04-23 點擊次數(shù)：1992
要跑瓊脂糖凝膠電泳， 5ng 就能很清楚的跑出來是這樣嗎？能夠照相的清楚的條帶，至少需要多少量呢？
參考見解：5ng 已經(jīng)可以了，但是或許20ng50ng-200ng效果好，在此范圍內呈線性。
把210bp的pcr產(chǎn)物進行酶切,得到190+20bp的兩個片段,請問能用瓊脂糖凝膠電泳檢測酶切結果嗎?用多大濃度的膠和多大的電壓呢?
參考見解：可以用瓊脂糖凝膠電泳分開,電壓不變,可用1.5%到2%的膠,20bp得片斷不一定能看得到,所以應用未酶切的PCR片斷作對照.
瓊脂糖濃度（W/V）
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大小范圍（bp）
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0.6%
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1000-23000
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0.8%
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800-10000
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1.0%
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400-8000
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1.2%
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300-7000
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1.5%
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200-4000
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2%
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100-3000
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丙烯酰胺凝膠電泳更適合于分離純化小分子量核酸（5-500bp）并且分辨率高，可以達到1個bp。所以建議進行丙烯酰胺凝膠電泳試試。
Marker做瓊脂糖凝膠電泳，發(fā)現(xiàn)Marker在加樣孔有一個明顯的亮帶，什么原因？
參考見解：marker有時會出現(xiàn)這樣的問題,應該是時間久了。新買時跑膠在點樣孔沒有,過一段時間就會在點樣孔出現(xiàn)亮點。也可能是蛋白，有時DNA提的不純含有蛋白時就會出現(xiàn)上樣孔有條帶的現(xiàn)象。
瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA時,跑出的帶后面出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象,什么原因造成的?
參考見解： DNA帶模糊??：
1、 DNA降解??避免核酸酶污染。
2、 DNA上樣量過多??減少凝膠中DNA上樣量。
3、 所用電泳條件不合適??電泳時電壓不應超過20V/cm，溫度＜30℃,巨大DNA鏈，溫度應＜15℃，核查所用電泳緩沖液是否有足夠的緩沖能力。
4、 DNA樣含鹽過高??電泳前通過乙醇沉淀去除過多的鹽。
5、 有蛋白污染??電泳前酚抽提去除蛋白。
6、 DNA變性，?電泳前勿加熱，用20mM NaCl緩沖液稀釋DNA。
將從組織提取的DNA進瓊行脂糖凝膠電泳，用的1.5%的膠加了EB，80V跑1小時，溴酚藍已經(jīng)跑到頭了，在紫外燈觀察什么帶也沒有，只見孔里面有橘紅色的亮光。好象沒跑出來，是怎么回事？
參考見解：
1、 根據(jù)目的條帶長度來調整凝膠濃度，一般1.5％左右，也不一定。
2、 紫外燈下沒見帶，不一定沒有出孔，而是量少看不到，可以測一下濃度看一下，或直接試跑一下PCR。
3、 加一個marker孔，尤其你*次跑膠時。
4、 電泳時間可能過長，一般75v×30min左右，但是具體看溴酚藍的離孔距離和目的條帶離孔距離。
