核酸印跡
更新時間:2021-05-24 點擊次數:1311
那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡單介紹一下關于核酸印跡:
核酸印跡是一種成熟的技術,用于鑒定先前在凝膠中分離的特定核苷酸序列的存在。(
Southern印跡以其**者英**生物學家Edwin Southern命名。在Southern印跡中,分析DNA,在Northern印跡中如果是RNA。在這兩種情況下,來自完整凝膠的DNA或RNA都將轉移到一塊硝酸纖維素膜或尼龍膜上。然后將膜暴露于雜交探針,即具有特定序列的單個DNA片段,要確定其在靶DNA(或RNA)中的存在。對探針DNA進行標記,以便可以通過射線照相,熒光或化學發光法對其進行檢測。
印跡是核酸從凝膠到膜的轉移,這通常使用毛細管轉移方法完成。在此過程中,將凝膠放置在紙芯的頂部,該紙芯浸入包含轉移緩沖液的容器中。膜夾在凝膠和一堆吸收性材料(通常是干紙巾)之間,該吸收性材料通過毛細管作用使轉移緩沖液通過凝膠。然后,凝膠中的核酸分子被緩沖液攜帶并固定在膜上。真空吸印是另一種越來越流行的吸印程序,因為它速度更快且回收率很高。真空印跡法還使用緩沖液流將核酸帶轉移到膜上,但是它使用真空而不是毛細管作用來創建該流。
一旦轉移完成,在凝膠上的所有核酸帶就被固定(印跡)在膜上,雜交過程可能開始。將膜與一小段DNA或RNA(探針)一起孵育,該DNA或RNA的序列與膜中特定的DNA或RNA序列互補。這允許探針與膜上的特定DNA片段雜交或結合。探針先前已被標記,通常用放射性原子,熒光染料標記或用酶標記,該酶在與合適的底物孵育后會產生化學發光信號。雜交后,標記的探針允許從膜上許多不同的DNA片段中檢測目標DNA片段。
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